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伯樂Gene Pulser Xcell 是一款全功能、模塊化的實驗室電穿孔儀,適用于細菌、酵母、哺乳動物細胞及其他真核細胞的轉化/轉染。其核心特點是 指數衰減波 電擊,通過精確控制電壓、電容和電阻參數,在細胞膜為伯樂(Bio-Rad)電穿孔系統(tǒng)選擇合適的電極杯(也稱電擊杯、電轉杯)是實驗成功的關鍵一步。選錯杯子會直接導致參數失效、產生電弧或細胞死亡。
選擇電極杯的核心決策流程基于以下四個要素:
1、電極杯間隙
2、電極杯材質與工藝
3、是否無菌
4、是否匹配您的Gene Pulser Xcell型號上形成可逆的瞬時孔隙,使外源DNA、RNA或其他分子高效進入細胞。
一、決定因素:電極杯間隙
間隙(電極之間的距離)是最最關鍵的參數,因為它直接決定電場強度。公式為:電場強度 (kV/cm) = 電壓 (V) / 間隙 (cm)。
1、常見間隙:1 mm
典型應用場景:哺乳動物貼壁/懸浮細胞(如HEK293、CHO、神經元原代細胞)、細菌感受態(tài)細胞(進行高效轉化)。
推薦起始條件 (以Gene Pulser Xcell為例):低壓長脈沖:電壓:100-300 V,電容:高(如950 μF),電阻:∞。
選擇理由與注意事項:常用于細胞轉染。小間隙能在較低電壓下產生高場強,減少產熱和細胞損傷,提高存活率。樣品體積最小(通常50-100 μL)。
2、常見間隙:2 mm
推薦起始條件 (以Gene Pulser Xcell為例):細菌:高壓短脈沖,如 2.5 kV, 25 μF, 200 Ω。
酵母:1.5 kV, 25 μF, 400 Ω。
選擇理由與注意事項:平衡了場強和樣品體積。樣品體積適中(通常100-400 μL)。是實驗室的選擇,尤其適合沒有特定優(yōu)化方案的初次實驗。
3、常見間隙:4 mm
推薦起始條件 (以Gene Pulser Xcell為例):低壓長脈沖:電壓:200-500 V,電容:高(如500-1000 μF),電阻:∞。
選擇理由與注意事項:間隙大,所需電壓高才能達到相同場強。樣品體積MAX(可達800 μL-1 mL)。適用于需要大量細胞或分子的實驗。
二、 電極杯材質與工藝
直接影響實驗的可重復性、是否產生電弧以及細胞毒性。
1、標準鋁電極杯
特點:常用、經濟。伯樂原廠杯質量穩(wěn)定,內壁經特殊處理,導電性均一。
適用場景:大多數常規(guī)實驗,如細菌轉化、哺乳動物細胞轉染。電擊后需立即將細胞轉移出杯子,因為鋁離子對細胞有毒性。
2、鍍金電極杯
特點:電極表面鍍金,生物相容性更好,無金屬離子浸出問題。導電性能優(yōu)異,更不易產生電弧。
適用場景:對毒性極其敏感的細胞(如原代細胞、干細胞)、需要長時間在杯內孵育的復雜實驗、或使用高鹽濃度緩沖液時(減少電弧風險)。價格較高。
3、聚丙烯電極杯
特點:注塑成型,無菌、無熱原、無DNA酶/RNA酶。電極已集成在內。
適用場景:對無菌要求高的臨床級或治療級應用,如CAR-T細胞、干細胞治療、mRNA疫苗制備等。是高級、安全的選擇。
三、無菌性要求
1、非無菌杯
包裝:散裝或簡單包裝。
處理方式:自行滅菌。可用75%乙醇浸泡(至少15分鐘)后用無菌水沖洗,并在超凈臺內晾干。嚴禁高壓滅菌或烘烤,會損壞塑料和電極。
適應場景:對無菌要求不高的細菌轉化,或預算有限的實驗室。
2、伽馬射線滅菌杯
包裝:密封包裝,經伽馬射線滅菌。
處理方式:開包即用。
適應場景:哺乳動物/真核細胞轉染。是細胞實驗的標準選擇。
3、無菌、無熱原、無酶杯
包裝:高級別包裝,通常為聚丙烯材質。
處理方式:開包即用,無需任何處理。
適應場景:基因治療、細胞治療、臨床研究等對安全性要求高的領域。
四、總結與建議
1、新手入門/通用實驗:購買 2mm間隙、伽馬射線滅菌的標準鋁電極杯。這是安全、通用的起點。
2、哺乳動物細胞轉染:優(yōu)先購買 1mm間隙、伽馬射線滅菌的標準鋁電極杯。如果細胞死活問題嚴重,可升級為 鍍金電極杯。
3、細菌高效轉化:購買 2mm間隙 的杯子即可,可選擇非無菌裝以節(jié)省成本(但需確保自行滅菌)。
4、高級關鍵實驗:毫不猶豫地選擇 聚丙烯材質、無菌無熱原無酶 的電極杯。
最后的重要提示:
勿重復使用一次性電極杯,這會導致交叉污染、參數不穩(wěn)定和電弧風險。
實驗前,務必檢查電極杯內壁是否有劃痕、裂紋或殘留物,損壞的杯子必須丟棄。
樣品緩沖液需覆蓋電極底部,且不得有氣泡,加樣后輕彈杯壁去除氣泡。
根據您選擇的電極杯間隙,重新計算或查閱文獻中的電場強度,并在Gene Pulser Xcell上設置正確的電壓參數。