伯樂1658003（通常指Mini-PROTEAN Tetra Cell系列）是實驗室常用的垂直電泳槽。根據標準操作流程為你整理了完整、可直接使用的詳細步驟。

一、伯樂1658003 小型垂直電泳槽標準操作流程

1、準備工作

耗材與試劑：

制膠玻璃板（1.0mm或1.5mm厚，短板+帶邊條的短板/長板）

配套的梳子（1.0mm或1.5mm，10孔/15孔）

制膠架、制膠底座、海綿墊（通常在制膠架上）

電泳緩沖液（Tris-Glycine SDS Running Buffer，即TGS）

蛋白樣品、預染Marker、上樣緩沖液

電泳儀電源

二、伯樂1658003 小型垂直電泳槽制膠步驟

1、清洗與組裝玻璃板

（1）清洗： 用洗潔精清洗玻璃板，尤其是帶邊條的短板（與膠接觸面），自來水沖凈后，用蒸餾水潤洗。自然晾干或用無屑紙巾擦干，確保無殘留膠漬和水漬。

（2）組裝：

將長板（無磨砂邊）平放在桌面上。

將短板（有磨砂邊/帶邊條）對齊疊放在長板上（底部和兩側對齊）。

將對齊的玻璃板放入制膠夾中（綠色夾子，通常有左右之分），玻璃板的底邊必須水平且卡在夾子的底部膠條上。

用力捏緊制膠夾，將其垂直安插在制膠架上。

2、配制分離膠與灌膠

（1）根據目標蛋白大小配制相應濃度的分離膠（下層膠），最后加入TEMED并迅速混勻。

（2）用移液槍或滴管吸取分離膠，從玻璃板一側邊緣緩慢注入，避免產生氣泡。

（3）灌至綠色制膠夾下沿（或距短板上沿約1.5-2cm處）。

（4）在膠面上輕輕加入一層水、乙醇或異丙醇壓平液面并隔絕空氣。

（5）靜置約20-30分鐘，直至凝膠與水層之間出現一條清晰的折光線，倒掉上層液體，用濾紙條吸干殘留水分。

3、配制濃縮膠與插梳子

（1）配制濃縮膠（上層膠），混勻后立即灌滿玻璃板剩余空間。

（2）將梳子水平插入濃縮膠中，從一側向另一側傾斜插入，避免產生氣泡。

（3）靜置約15-20分鐘，等待濃縮膠凝固。凝固后可立即使用，或用濕潤紙巾包裹后放入4℃冰箱保存。

三、 電泳步驟

1、組裝電泳芯與內槽

（1）取下制膠架上的玻璃板，將其從制膠夾上取下，沖洗掉多余的殘膠。

（2）準備電極芯： 將兩塊凝膠玻璃板（短板朝內）安裝在電極芯兩側。

（3）如果是只跑一塊膠，電極芯的另一側需要用緩沖液擋板（白色塑料板）代替，確保密封。

（4）扣緊： 將電極芯兩側的夾子扣緊，夾住玻璃板和擋板。

（5）內槽檢漏與加液： 將組裝好的電極芯放入電泳槽中。向兩塊玻璃板之間的內槽（電極芯內部）倒入新鮮的電泳緩沖液，倒滿至溢出。靜置1分鐘觀察液面是否明顯下降（漏液）。如不漏，必須將內槽加滿。

2、上樣

（1）輕輕垂直拔出梳子。

（2）用電泳緩沖液沖洗加樣孔，去除未聚合的凝膠碎片。

（3）上樣： 用微量進樣器或槍頭上樣。將槍頭插入加樣孔底部，輕輕打出樣品。緩慢打出，防止樣品沖出孔外。記錄上樣順序。

3、連接電源

（1）在外槽（電泳槽主體）中倒入電泳緩沖液，液面至少淹沒底部金屬絲。

（2）蓋上蓋子（黑對黑，紅對紅）。

（3）連接電源：正極（紅）接紅，負極（黑）接黑。

（4）設置參數：

濃縮膠： 恒壓 80V，約20-30分鐘（樣品跑成一條細線并進入分離膠）。

分離膠： 恒壓 120-150V，約40-60分鐘。

（5）電泳至溴酚藍（藍色染料）到達玻璃板底部邊緣時，停止電泳。

四、 拆膠與后續

1、斷電： 先關電源，拔掉電源線，取下蓋子。

2、倒液： 倒掉電泳緩沖液。

3、取板： 取出電極芯，打開夾子，取出玻璃板。

4、撬膠： 使用撬膠板（塑料刮片）在玻璃板一側輕輕撬開。通常長板較易分離。切掉濃縮膠，將分離膠小心剝下放入染色液中進行后續考馬斯亮藍染色或轉膜操作。

五、 常見問題與排查

1、漏膠：

（1）原因1：玻璃板底部未對齊。

（2）原因2：制膠架底部的海綿墊老化變硬。解決方案： 取少量1%瓊脂糖凝膠融化后，在玻璃板底部四周封邊。

2、電泳時條帶呈“微笑"或“皺眉"：

（1）微笑（兩邊慢中間快）： 通常是凝膠溫度過高，建議降低電壓或在冰浴中進行。

（2）皺眉（兩邊快中間慢）： 通常是內槽緩沖液泄漏導致液面低于短板。這是1658003常見的錯誤！ 務必保證內槽液面是滿的，外槽液面只需沒過電極絲即可，不要加得太滿導致內外壓力不平衡。

3、跑得極慢：

檢查緩沖液是否誤配成非SDS的緩沖液（如TAE/TBE，那是核酸電泳用的），或緩沖液過度稀釋。