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這是一臺非常強大且專一的定量分析儀器,主要用于對核酸和蛋白質(zhì)進行精確定量。簡單來說,它的核心功能就是回答“我的樣本里到底有多少DNA/RNA/蛋白?"這個問題,并且回答得非常準確。以下是Qubit Flex熒光計可以完成的主要實驗和其核心特點:
一、賽默飛QubitFlex熒光計核心實驗功能:精確定量
Qubit Flex使用的熒光染料技術,這些染料只與特定的目標分子(如雙鏈DNA)結(jié)合并發(fā)光,因此不受其他污染物(如RNA、游離核苷酸、鹽離子等)的干擾,結(jié)果比傳統(tǒng)紫外分光光度法(如NanoDrop)更精確、更專一。
1、核酸定量
dsDNA HS/Broad Range Assay: 這是常用的功能。高靈敏度(HS) 模式可精確測量10 pg/μL - 100 ng/μL的微量DNA,非常適合下一代測序(NGS)、微陣列分析、PCR等珍貴樣本。寬范圍(BR) 模式則用于測量濃度更高的樣本。
ssDNA Assay: 專門用于定量單鏈DNA,這在某些分子生物學應用中非常重要。
RNA HS/Broad Range Assay: 專門用于精確測量RNA的濃度,對轉(zhuǎn)錄組學、qRT-PCR等實驗至關重要。
miRNA Assay: 無需單獨分離,可直接從總RNA樣本中精確量化microRNA這類小RNA,對 miRNA研究非常方便。
2、蛋白質(zhì)定量
Protein Assay: 使用與特定氨基酸殘基結(jié)合的熒光染料,精確測量蛋白質(zhì)濃度,范圍是1 - 500 μg/mL。這對于蛋白質(zhì)純化、Western Blot前的樣本準備等實驗非常有用。
二、賽默飛QubitFlex熒光計優(yōu)勢與高級功能
Qubit Flex不僅僅是臺簡單的定量儀,它的“Flex"(靈活)體現(xiàn)在以下幾個方面:
1、8聯(lián)管高通量檢測:
特點是支持8連管(strip tube),一次最多可以同時檢測8個樣本,極大地提高了效率,特別適合需要處理大量樣本的實驗室。
2、大彩色觸摸屏與直觀界面:
內(nèi)置大型交互式觸摸屏,操作簡單直觀,可以直接在儀器上查看結(jié)果、圖表和實驗設置。
3、內(nèi)置標準曲線和多種應用流程:
儀器內(nèi)置了預編程的實驗流程(Protocols),用戶只需選擇對應的檢測項目(如dsDNA HS),然后按照屏幕指示加入樣品和染料即可,無需自行制作標準曲線(但每批實驗仍需做1-2個標準點進行校準)。
4、支持免提操作(hands-free):在安裝好轉(zhuǎn)子并開始運行后,轉(zhuǎn)子會自動旋轉(zhuǎn)到每個孔進行測量,無需手動移動樣品管。
5、數(shù)據(jù)管理和輸出:
可以將結(jié)果直接通過USB導出,方便進行記錄和進一步分析。
三、QubitFlex熒光計典型應用場景
1、NGS文庫定量(最關鍵的應用): 在構(gòu)建好NGS測序文庫后,必須對文庫進行精確定量,以確保上機測序時加載的DNA量準確無誤,這是獲得高質(zhì)量測序數(shù)據(jù)的關鍵步驟。Qubit Flex的高通量和精確性使其成為NGS平臺的“黃金標準"。
2、qPCR/qRT-PCR模板定量: 準確定量cDNA或gDNA模板濃度,是確保PCR反應效率和結(jié)果可靠性的前提。
3、蛋白質(zhì)組學分析: 在蛋白質(zhì)提取、純化后,精確測定蛋白濃度,以便在后續(xù)實驗(如酶解、Western Blot)中上樣等量蛋白。
4、質(zhì)量控制(QC): 對提取的核酸或蛋白樣本進行質(zhì)量檢查,確保樣本濃度符合下游實驗要求。
四、總結(jié)
Qubit Flex熒光計是一臺專為生命科學實驗室設計的高通量、高靈敏度的精密定量儀器。 它的核心價值在于:
1、精準: 對特定目標分子(DNA, RNA, Protein)進行特異性定量,結(jié)果可靠。
2、高效: 8聯(lián)管設計適合中高通量樣本檢測,節(jié)省時間。
3、易用: 觸摸屏和內(nèi)置流程使操作非常簡單。
如果您的實驗需要精確知道核酸或蛋白的濃度(尤其是樣品珍貴或濃度很低時),例如進行NGS、高級PCR、蛋白質(zhì)研究等,Qubit Flex是非常理想的選擇。如果只是想快速了解一下樣本的大概濃度和純度,NanoDrop則更快捷經(jīng)濟。許多實驗室會同時配備這兩種儀器,用于不同目的的質(zhì)量控制。